Что такое коэффициент позитивности при сифилисе

Treponema pallidum (сифилис), IgG антитела (иммуноблот, вестерн-блот), качественный, кровь

Сифилис – хроническое венерическое заболевание, в течении которого инфекционный процесс затрагивает все органы и ткани человеческого организма. Возбудитель — бледная спирохета, или Treponema pallidum, путь передачи в большинстве случаев половой, также возможен бытовой – через инфицированное бельё или предметы обихода и вертикальный – от больной матери к плоду во время беременности. Источник инфекции – человек, больной сифилисом. Заболевание развивается через несколько стадий. По прошествии с момента заражения 10-90 суток в том месте, где внедрился возбудитель, появляется так называемый твердый шанкр — безболезненная язва, и воспаляются регионарные лимфоузлы (первичный сифилис). Через 2-6 месяца с момента заражения или через 2-10 недель после появления твердого шанкра развивается вторичный сифилис, т.е. происходит генерализация инфекции. При латентном, или скрытом сифилисе положительные серологические реакции сочетаются с отсутствием клинических проявлений. Латентный сифилис разделяют на ранний – на протяжении менее чем 2 лет с начала заболевания, и поздний – через 2 года и более с начала заболевания. В среднем через 3-7 лет после заражения развивается третичный сифилис, он характеризуется появлением гумм.

Когда происходит инфицирование Т. pallidum, иммунная система начинает активно вырабатывать антитела к трепонеме. При сифилисе в крови можно обнаружить два вида таких антител: IgM и IgG.

Иммуноглобулины класса G к Т. pallidum в достаточном для определения количестве появляются в крови через 3-4 недели с момента инфицирования. Их концентрация непрерывно нарастает и к 6-й неделе достигает максимума, преобладая над концентрацией IgM, и сохраняется на этом уровне в течение долгого времени. После проведенного эффективного лечения уровень IgG постепенно снижается, но значительно медленнее, чем уровень IgM. Как правило, IgG в достаточных для определения количествах можно обнаружить через год и более после лечения, а в некоторых случаях — спустя десятилетия.

Метод иммуноблота (вестерн-блот) – метод иммуноанализа, позволяющий идентифицировать наличие антител к отдельным антигенам.
Подробнее о методе иммуноблота — его преимуществах и области применения в медицинской диагностике.

Референсные значения — норма
(Treponema pallidum (сифилис), IgG антитела (иммуноблот, вестерн-блот), качественный, кровь)

Информация, касающаяся референсных значений показателей, а также сам состав входящих в анализ показателей может несколько отличаться в зависимости от лаборатории!

КП (коэффициент позитивности) 1/10 : 0 — 0,99.

Что такое коэффициент позитивности при сифилисе

  • Статьи
  • Ротавирус у детей. Как происходит заражение?
  • Как научиться «управлять» эндокринной системой?
  • Статьи
  • Кухня: функциональная зона или главное место общения всей семьи
  • Законы, вступающие в силу с 1 января 2017 года: изменения в сфере недвижимости и жилищного законодательства
  1. Владмама
  2. Консультации
  3. Здоровье
  4. Клиническая лабораторная диагностика
  5. Мария Юрьевна Хасина

Мария Юрьевна Хасина

Клиническая лабораторная диагностика

Здравствуйте! Сдавал анализ крови на определение антител к аскаридам (ascaris lumbricoides), в графе результат стоит 0,15 МЕ/мл. Что это значит?

Здравствуйте, Сергей! Вы не написали, какие антитела исследованы, а, также, что написано в графе референтный интервал. Поэтому прокомментировать вопрос невозможно.

Помогите, пожалуйста, расшифровать анализы. Жена беременная, 12 недель.

ИФА сум. полож. +1/64,070 м ОТР РПГА4 +.

Врач говорит, что сифилис, но она никогда им не болела. Спасибо большое!

Здравствуйте, данные представлены не корректно. Не ясно, какие классы антител использованы. Жену должны направить к дерматовенерологу и там ситуацию разъяснят.

Добрый день. Расшифруйте, пожалуйста, анализ в прикреплённом файле.

Анализ дал сомнительный результат. Пересдайте его.

Добрый день. Помогите прочитать анализы.

  • IgE общий — 789,3 МЕ/мл.,
  • антитела к токсокаре — отр.,
  • к лямблиям — 0,082 отр.,
  • кал на яйца глист — отр.

Девочка 13 лет. Кашель с 20 декабря 2018 года. Состоит на учете у аллерголога. Начались боли в области пупка и головные боли, температура повышается до 37.

  1. У ребенка действительно есть аллергическое заболевание, иммуноглобулин Е очень высокий, а значит высока сенсибилизация. Ребенка надо лечить у аллерголога.
  2. В клиническом анализе крови есть лейкоцитарная реакция — на фоне температуры — адекватная реакция на воспаление. Срочно к педиатру — дифференцировать его источник, особенно если есть боли в животе, возможен аппендицит или еще какая-то патология.
  3. В клиническом анализе есть эозинофилия, что также указывает на аллергию.

Добрый день. Объясните, пожалуйста, результат анализа на сифилис ОП КРИТ — 0,250. ОП СЫВ — 2,638.

Это серологический шрам? Возможен ли рецидив болезни? И есть ли возможность заражения от человека с такими анализами?

Это шрам. Чтоб исключить рецидив нужно стать ЭДС.

Здравствуйте.
Anti-Лямблия. Слабо положительный1:10–1:20. ОП крит.— 0,249. ОПсыв.— 0,414.

Что обозначает результат.

Здравствуйте, вы не написали какого класса антитела. Наличие антител говорит о контакте с лямблиями.

Здравствуйте, помогите, расшифровать, пожалуйста.

Тест на сифилис положителен. Это может быть при текущем или перенесенном в прошлом заболевании. Тест на анти НВs отрицательный — Вы не привиты от В гепатита.

Здравствуйте, сдавала на лямблиоз. Результат: 0,90 (сомнительный). Иммуноглобулин lg E общий — 547,9 ME/мл. Что это значит, вообще переживаю.

Это значит, что вероятность лямблиоза маленькая. Имменоглобулин Е говорит о том, что вы сенсибилизированы, у Вас есть аллергическое заболевание.

Здравствуйте. Вопрос: может ли киста почки быть спровоцирована паразитами?

Вчера получила анализ на антитела:

  • anti-Echinococcus IgG коэфф. позитивности — 1,46
  • anti — Toxocara IgG (КП) — 1,28
  • anti-Ascaris IgG (КП) — 2,23
  • остальные результаты отрицательные.

Анализы стали делать из-за подозрения на паразитов в печени мужа.

Все анализы мужа — отрицательные. Живем вместе много лет, мне — 55, мужу — 59.

Здравствуйте, Ольга. Это очень низкие КП, на гране сомнительных. Результаты могут быть ложноположительными из-за каких-либо еще заболеваний, а могут говорить о перенесённой инвазии в прошлом. По кисте — без комментариев, объективных данных по ней я не вижу.

Добрый вечер! Помогите понять, о чем говорит иммуноглобулин A, G к хеликобактер пилори в моем анализе. Перенесенный, хронический или рецидивирующий?

Анализы назначил гинеколог. Мои жалобы — постоянное воспаление, боли внизу живота. ИППП пцр отрицательные. После этих анализов гинеколог отправил к гастроэнтерологу. Сказал, вся проблема идет оттуда.

Результаты антител к НВ говорят о наличии инфекции и текущем воспалении. К воспалению органов малого таза прямого отношения это не имеет. Живет данный микроб в желудке и вызывает язвенную болезнь. Если со стороны желудка есть жалобы — поход к гастроэтнерологу обоснован.

Проходим мед осмотр на поступление. Общий анализ крови. Анализ мочи. Анализ крови на гепатит положительный. Подросток 17 лет. Наркотиков нет. Проходили ХТИ тест, половую жизнь не ведёт. Анализ на ВИЧ — отрицательный. Откуда, что прилетело? Общий анализ крови и мочи смотрела терапевт — ничего не сказала. Возможна ли ошибка? Симптомов никаких нет.

Здравствуйте! Анализ для начала следует пересдать. Сразу лучше сдавать развернутый профиль серологических маркеров вирусных гепатитов. В остальных исследованиях значимых отклонений нет.

Здравствуйте! Расшифруйте, пожалуйста, результат анализа, мне доктор сказала что всё нормально, а парень утверждает, что подцепил что-то от меня. Заранее огромное спасибо. Прикрепляю анализ крови.

Здравствуйте. Для поиска острых ИППП сдают не кровь, а соскоб. Сдайте фемофлор скрин из влагалища. По данному анализу надо искать хламидий и уреаплазм с соскобе. Они могут быть.

добрый день. Подскажите, пожалуйста, сдавала анализ на трепонема паллидум, антитела суммарные, результат — 351COI. Это я понимаю, положительный результат?

Здравствуйте. Мне не знаком такой формат выдачи, возможно, если я увижу бланк, то смогу прокомментировать результат.

Добрый день, свекрови 65 лет, результат анализа на сифилис положительный, можете прокомментировать?

Здравствуйте. Могу предположить, что она когда-то болела.

Здравствуйте! Подскажите, пожалуйста, что означает этот результат? 15 лет назад был пролеченный сифилис, анализы сдаю регулярно, на антитела к трепонеме всегда было 0, в этот раз 33,12. Что это?

Вряд ли ранее Вы сдавали антитела. Скорее ЭДС. ЭДС да, будет отрицательная, но антитела памяти будут всегда.

Treponema pallidum, IgG, титр

Сифилис – венерическое инфекционное заболевание, вызываемое бактериями treponema pallidum (бледной трепонемой).

Определение антител класса IgG к возбудителю сифилиса – это метод ранней диагностики, который может использоваться для различения свежеприобретенной и давней инфекции.

Синонимы русские

Антитела класса IgG к возбудителю сифилиса, иммуноглобулины класса G к бледной трепонеме, антитела к антигенам treponema pallidum IgG.

Синонимы английские

Syphilis IgG, antiTP IgG, antibodies to t. pallidum, IgG, antitreponema pallidum IgG.

Метод исследования

Иммуноферментный анализ (ИФА).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Сифилис – это инфекционное заболевание, которое чаще всего передается половым путем, как, например, при прямом контакте с сифилитической язвой (твердым шанкром). Он легкоизлечим, но при бездействии грозит серьезными проблемами со здоровьем. Инфицированная мать может передавать заболевание своему плоду, у которого впоследствии развиваются серьезные отклонения.

Различают несколько стадий сифилиса. Первичная наступает примерно через 2-3 недели после заражения. Одна или иногда несколько язв, называемых шанкрами, появляются, как правило, на той части тела, которая контактировала с шанкром больного человека, например пенисом или влагалищем. Зачастую твердый шанкр безболезненный и остается незамеченным, особенно если он находится в прямой кишке или на шейке матки. Шанкр исчезает через 4-6 недель.

Вторичный сифилис начинается через 2-8 недель после возникновения твердого шанкра. Эта стадия заболевания характеризуется появлением на коже сыпи, чаще на ладонях и подошвах. Иногда встречаются и другие симптомы, к примеру лихорадка, усталость, опухание лимфатических узлов, боль в горле и ломота в теле.

Другие публикации:  Признаки туберкулеза и как лечить

Сифилис способен протекать в скрытой форме, во время которой у инфицированного человека не проявляется никаких симптомов, но в то же время он продолжает оставаться носителем инфекции. Это может происходить годами.

Без лечения примерно у 15 % больных развиваются симптомы позднего, или третичного, сифилиса. Эта стадия иногда длится несколько лет и приводит к психическим заболеваниям, слепоте, неврологическим проблемам, болезням сердца и даже к смерти.

От сифилиса можно избавиться с помощью антибиотиков (предпочтительно применять производные пенициллина). Причем на ранней стадии заболевание лечится легче и быстрее. Отметим, что пациентам, инфицированным больше года, может понадобиться более длительное лечение.

Когда происходит контакт человека с t. pallidum, его иммунная система реагирует, вырабатывая антитела к бактерии. В крови могут быть обнаружены два вида таких антител: IgM и IgG.

Иммуноглобулины класса G к t. pallidum в определяемых количествах появляются в крови через 3-4 недели с момента инфицирования. Концентрация их нарастает и на 6-й неделе начинает преобладать над концентрацией IgM, достигая максимума, а затем сохраняется на определенном уровне в течение длительного времени. После эффективного лечения уровень иммуноглобулинов постепенно снижается, но происходит это гораздо медленнее, чем в случае с IgM. Как правило, IgG в определяемых количествах могут обнаруживаться через год и более после проведенной терапии, а в отдельных случаях даже спустя десятилетия.

Существует несколько методов, которые могут быть использованы для проверки на сифилис, данный наиболее чувствительный и специфичный для обнаружения трепонемных антител на всех стадиях.

Для чего используется исследование?

Исследование проводится в целях обнаружения бактерии, которая вызывает развитие сифилиса, – treponema pallidum (бледной трепонемы). В качестве профилактики оно рекомендовано всем беременным женщинам, желательно сразу при постановке на учет.

Когда назначается исследование?

  • При симптомах сифилиса, таких как твердый шанкр на половых органах или в горле.
  • Когда пациент лечится от другого ЗППП, например от гонореи.
  • При беременности, потому что сифилис может передаваться плоду и представлять смертельную опасность.
  • Если пациент был инфицирован, он должен повторить анализ на сифилис через 3, 6, 12 и 24 месяца, чтобы убедиться, что лечение прошло успешно.

Что означают результаты?

КП (коэффициент позитивности) 1/10 : 0 — 0,99.

Причины отрицательного результата:

  • отсутствие инфицирования,
  • слишком раннее инфицирование, когда не выработался иммунный ответ.

Причины положительного результата:

  • первичный, вторичный, третичный сифилис,
  • скрытый сифилис,
  • пролеченный сифилис.

Положительный результат анализа указывает на текущее инфицирование трепонемой, скрытый или пролеченный сифилис. Вместе с тем отрицательный результат не всегда означает, что у пациента нет сифилиса.

Положительный анализ на антитела IgG к Treponema pallidum у ранее серонегативного пациента, а также значительный прирост титров в парных сыворотках, взятых с интервалом 7 дней, подтверждает наличие инфекции.

Поскольку антитела IgG к Treponema pallidum могут свободно проникать через плаценту, положительный результат у младенцев не является основанием для постановки диагноза «врожденный сифилис».

Кроме того, отрицательный результат может свидетельствовать об отсутствии болезни или ее слишком раннем сроке, когда не выработался иммунный ответ. В то же время отсутствие IgG у младенца, родившегося от инфицированной матери, не исключает наличия врожденного заболевания, поскольку на момент исследования антитела могут еще не сформироваться.

Что может влиять на результат?

Вероятные причины ложноположительного результата:

  • ВИЧ,
  • болезнь Лайма,
  • малярия,
  • системная красная волчанка,
  • некоторые виды пневмоний,
  • наркомания,
  • беременность.



Важные замечания

  • Обследование на сифилис непременно должно быть комплексным: врач должен учесть анамнез, клиническую картину и лабораторные данные.
  • Людям, ведущим активную сексуальную жизнь, необходимо консультироваться с врачом о любых подозрительных высыпаниях или болях в области половых органов.
  • Если выявляется инфицирование, следует поставить в известность и сексуального партнера, чтобы он тоже прошел обследование и при необходимости лечение.
  • При сифилисе риск заражения другими ЗППП увеличивается, в том числе и риск заражения ВИЧ – вирусом, который предшествует СПИДу. Твердый шанкр, вызванный сифилисом, способствует передаче ВИЧ-инфекции.
  • Treponema pallidum может также передаваться при переливании крови, через медицинские загрязненные инструменты, поэтому очень важно проводить обследование на сифилис перед госпитализацией в стационар.
  • Использование данного исследования диагностики сифилиса предусматривает действующий приказ Министерства здравоохранения РФ № 87 от 26 марта 2001 года «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса».

Также рекомендуется

Кто назначает исследование?

Дерматолог, дерматовенеролог, гинеколог, уролог, инфекционист, терапевт, педиатр.

Сифилис, антитела к Treponema pallidum lgM,IgG колич.

Сифилис, антитела к Treponema pallidum lgM,IgG количественный — метод количественного определения антител к антигенам Treponema pallidum, возбудителя сифилиса. Относится к высокочувствительным методам диагностики сифилиса.

Данное исследование рекомендуется проводить совместно с дополняющим его исследованием — диагностика сифилиса RPR.

Сифилис — инфекционное заболевание, вызываемое бледной трепонемой (Treponema pallidum), передающееся в основном половым путем, склонное к хроническому течению и поражающее большинство органов и систем организма. Сифилис характеризуется медленным прогрессирующим течением. На поздних стадиях он может приводить к тяжелым поражениям нервной системы и внутренних органов.

Клиническая картина при сифилисе
Клинические проявления сифилиса очень разнообразны и зависят от стадии заболевания. Выделяют несколько стадий сифилиса. Первичная стадия наступает примерно через 2–3 недели после заражения. На этой стадии проявляются одна или иногда несколько язв, называемых шанкром, как правило, на той части тела, которая контактировала с шанкром больного человека, например пенисом или влагалищем. Во многих случаях твердый шанкр безболезненный и остается незамеченным, особенно если он находится в прямой кишке или на шейке матки. Шанкр исчезает через 4–6 недель.

Вторая стадия заболевания начинается через 2–8 недель после возникновения твердого шанкра. Она характеризуется появлением сыпи, чаще на ладонях и подошвах. Иногда встречаются и другие симптомы, к примеру лихорадка, усталость, опухание лимфатических узлов, боль в горле и ломота в теле.

Сифилис способен протекать в скрытой форме, во время которой у инфицированного человека не проявляется никаких симптомов, но в то же время он продолжает оставаться носителем инфекции. Это может длиться годами.

Без лечения примерно у 15% больных развиваются симптомы позднего, или третичного, сифилиса. Эта стадия иногда длится несколько лет, и приводит к психическим заболеваниям, слепоте, неврологическим проблемам, болезням сердца и даже к смерти.

От сифилиса можно избавиться с помощью антибиотиков (предпочтительно применять производные пенициллина). Причем на ранней стадии заболевание лечится легче и быстрее.

При контакте человека с Treponema pallidum, его иммунная система вырабатывает антитела к бактерии. В крови могут быть обнаружены два вида таких антител: IgM и IgG.

Антитела класса IgM
Антитела класса IgM вырабатываются организмом в первую очередь. Они выявляются в сыворотке крови в конце второй недели заболевания и исчезают у нелеченых больных примерно через 1–1,5 года, при лечении раннего сифилиса — через 3–6 мес., позднего — через год. Они присутствуют у большей части пациентов с первичным и вторичным сифилисом, поэтому тест на IgM может быть использован для различения давней инфекции от только приобретенной.

Специфических трепонемных антител IgM нет у лечившихся в прошлом пациентов, но их отсутствие само по себе не говорит об эффективности проведенной терапии, поскольку у большинства из тех, кто не лечился, в скрытой стадии сифилиса IgM-антитела тоже отсутствуют.

Антитела класса IgG
Антитела класса IgG появляются в крови через 3–4 недели после инфицирования. Концентрация их нарастает и достигает максимума на 6-й неделе, в этот момент их концентрация преобладает над концентрацией IgM. Иммуноглобулины класса G на определённом уровне сохраняются длительное время, иногда пожизненно.

Показания:

  • диагностика и подтверждение сифилиса;
  • планирование беременности;
  • подготовка к операции;
  • беспорядочные половые контакты;
  • проверка доноров.

Подготовка
Кровь рекомендуется сдавать утром, в период с 8 до 12 часов. Взятие крови производится натощак, спустя 4–6 часов голодания. Допускается употребление воды без газа и сахара. Накануне сдачи исследования следует избегать пищевых перегрузок.

Интерпретация результатов
Единицы измерения: УЕ*

Положительный результат будет сопровождаться дополнительным комментарием с указанием коэффициента позитивности пробы (КП*).

Что такое коэффициент позитивности при сифилисе

управление в медицине
персональное и общественное здоровье
бесплатные консультации специалистов

не диагностика и лечение, но указание выбора правильного направления движения к оным

Гуднева Ирина
врач-лаборант

Зарегистрирован: 16.11.2008
Сообщения: 93

АНТИТЕЛООБРАЗОВАНИЕ
ПРИ СИФИЛИТИЧЕСКОЙ
ИНФЕКЦИИ

Первыми после заражения вырабатываются иммуноглобулины М, выявляемые в определяемых количествах на второй неделе и достигающие максимальной концентрации в крови на 6—9 неделе [ 1 ]. Затем концентрация их даже без лечения начинает снижаться вследствие замены их иммуноглобулинами класса G, достигая с течением времени подпорогового уровня.

Рецидив заболевания или повторное заражение приводят к новому нарастанию концентрации IgM, причем в случае рецидива антитела этого класса часто вырабатываются даже в более высоких концентрациях, чем при первичном инфицировании.

После проведения эффективного лечения концентрация IgМ быстро падает, и, обычно, через 3-9 месяцев они перестают определяться в сыворотке крови [ 2 ].

Иммуноглобулины G в определяемых количествах появляются в крови через 3-4 недели от момента инфицирования. Концентрация их нарастает, на 6-ой неделе начинает преобладать над концентрацией IgM, и, достигая максимума, сохраняется на определенном уровне в течение длительного времени.

После проведения эффективного лечения концентрация иммуноглобулинов постепенно снижается, но происходит это гораздо медленнее, чем в случае с IgМ. Как правило, IgG в определяемых количествах могут обнаруживаться спустя год и более после проведенной терапии, а в отдельных случаях — даже спустя десятилетия.

У новорожденного первые антитела также относятся к классу иммуноглобулинов М [3]. Известно, что при инфицировании плода они могут синтезироваться, начиная с 3 месяца беременности, а инфицирование может произойти на любой стадии; пассивно же перенесенные через плаценту материнские иммуноглобулины G у здорового неинфицированного ребенка катаболизируются и исчезают только через 12-18 месяцев [4]. Принципиальных отличий в динамике антителообразования при сифилисе у детей в литературе не встречается.

Другие публикации:  Новости о менингите в ростове-на-дону

Гуднева Ирина
врач-лаборант

Зарегистрирован: 16.11.2008
Сообщения: 93

Действующий приказ Министерства Здравоохранения РФ № 87 от 26 марта 2001 года «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса» предусматривает использование для серо- и ликвордиагностики сифилиса следующих реакций:

  • Микрореакция преципитации (МР) с кардиолипиновым антигеном.
  • Иммуноферментный анализ (ИФА).
  • Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА).
  • Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) в модификациях.
  • Комплекс серологических реакций на сифилис (КСР), состоящий из реакции связывания комплемента (РСК) с трепонемным и кардиолипиновым антигенами и МР.
  • Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ).

При этом нетрепонемные тесты (МР и РСК с кардиолипиновым антигеном) используются лишь как отборочные, в то время как трепонемные тесты служат для подтверждения их результатов.

Трепонемные тесты:

  • обладают более высокими чувствительностью (РИФ) и специфичностью (РИФ, РИТ)
  • технически сложны, поэтому их применение ограничено рамками специализированных учреждений.
  • могут давать (РИФ и, особенно, РСК) ложноположительные результаты, обусловленные перекрестными реакциями. Показано, например, что в РИФ они могут быть связаны с боррелиозом, генитальным простым герпесом [9, 10]. Кроме того, причиной ложноположительного результата может быть наличие в исследуемом образце антител к общим антигенам спирохет, так как некоторые спирохеты являются частью нормальной человеческой флоры [11].

Нетрепонемные тесты:

  • просты в постановке, дешевы, удобны для исследования большого количества образцов
  • обладают низкой чувствительностью при первичном, третичном и позднем латентном сифилисе
  • дают высокий (70%) процент ложноположительных результатов.
    • при обследовании беременных женщин, по некоторым данным — до 27% от общего количества положительных результатов [7]
    • при заболеваниях соединительной ткани (системная красная волчанка)
    • при сахарном диабете
    • возрастных изменениях
    • онкологических заболеваниях и т.п. [8]

Существенным недостатком всех перечисленных классических тестов (в отечественном варианте) является то, что они не унифицированы. Приобретая или получая различные компоненты, необходимые для проведения анализа, специалисты диагностической лаборатории вынуждены самостоятельно «подтитровывать» их, подбирать соответствующие контрольные сыворотки и т.д. При этом точность проводимого анализа зависит от множества факторов, начиная от качества приобретtнных реагентов и заканчивая уровнем квалификации персонала лаборатории.

Единственный путь преодоления данного недостатка — выпуск коммерческих тест-систем. За рубежом в медицинской практике давно и успешно используются коммерческие наборы для постановки реакций RРR и VDRL (аналоги нашей МР), а также FТА-АВS (аналог РИФабс). Совсем недавно появилась первая отечественная коммерческая тест-система для определения антитрепонемных антител в реакции иммунофлюоресценции в модификациях РИФабс и РИФ200 (ЗАО «Вектор-Вест»).

В настоящее время в отечественной практике, кроме перечисленных выше реакций, широко применяются и другие тесты, в частности — реакции, основанные на гемагглютинации (реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) или её зарубежные аналоги — the Т. pallidum hemagglutination assay (ТРНА) и др.), а также иммуноферментный анализ (ИФА). Являясь специфическими трепонемными тестами и обладая высокими чувствительностью и специфичностью, они легко выполняются, не требуют высокой профессиональной подготовки персонала и могут быть использованы при обследовании большого количества образцов. За рубежом эти тесты широко и успешно используются для скрининга и диагностики сифилиса. Однако многие исследователи отмечают более низкую по сравнению с РИФабс чувствительность РПГА на ранних стадиях заболевания [1;2].

Еще одним недостатком этого метода, по сравнению с ИФА, является субъективность в оценке результатов. Попытки автоматизировать учет результатов приведут к снижению доступности этого теста для мелких лабораторий. По чувствительности и специфичности проводимого анализа ИФА-тесты наиболее приближены к РИФабс, которая до сих пор считается «золотым стандартом» при испытании новых методов диагностики сифилиса. В то же время, работа с ИФА-тест-системами не требует высокой профессиональной подготовки специалистов, так как диагностические наборы, предлагаемые производителями, укомплектованы всеми материалами и реагентами, необходимыми для постановки реакции, в оттитрованном виде. Кроме того, все ИФА-тест-системы предусматривают автоматический учёт результатов, что исключает субъективность в их оценке. Относительная дешевизна, простота постановки реакции, удобство использования для обследования большого количества образцов позволяют применять тест-системы для серодиагностики сифилиса методом ИФА как скрининговые, обладающие, в то же время, высокими диагностическими качествами.

Приказ № 87 предписывает применение МР лишь в качестве отборочного теста при обследовании населения на сифилис, а в количественном варианте и для контроля эффективности лечения, заменив ею количественную постановку РСК с кардиолипиновым антигеном. В качестве отборочных тестов для профилактического обследования населения можно также использовать КСР и специфические трепонемные реакции — ИФА и РПГА.
РИТ, РИФ, ИФА и РПГА, являясь высокочувствительными и высокоспецифичными реакциями, применяются в качестве диагностических подтверждающих тестов.

При обследовании доноров необходимо использовать комплекс серологических реакций, включающий МР и РСК либо МР и ИФА, либо МР и РПГА.

При диагностике скрытого сифилиса необходимо осуществлять постановку двух специфических тестов одновременно.

ИФА и РПГА являются более высокочувствительными, специфическими и воспроизводимыми тестами, которые можно использовать в качестве отборочных и подтверждающих тестов.

Гуднева Ирина
врач-лаборант

Зарегистрирован: 16.11.2008
Сообщения: 93

ОБЩИЕ ПРИНЦИПЫ ИФА

В ходе инкубации иммуносорбента с испытуемой сывороткой при наличии в ней антител к данному антигену происходит их связывание в комплекс «антиген—антитело». После удаления несвязавшихся иммуноглобулинов следует инкубация с мечеными ферментом антителами к иммуноглобулинам человека (конъюгатом), в ходе которой на поверхности носителя происходит присоединение к имеющимся комплексам «антиген-антитело» антител, меченых ферментом (в качестве фермента чаще всего используется пероксидаза хрена). После удаления несвязавшегося конъюгата в ходе инкубации с раствором субстрата происходит взаимодействие фермента с субстратом, в результате чего развивается цветная реакция, интенсивность которой зависит от количества связанных сывороточных антител (в случае использования пероксидазного конъюгата в качестве субстрата применяют перекись водорода в сочетании с ортофенилендиамином (ОФД), 5-аминосалициловой кислотой (5-АСК) или тетраметилбензидином (ТМБ)). Результат реакции оценивается спектрофотометрически с выводом цифровых данных, что исключает субъективность оценки. Некоторые иммуноферментные тест-системы допускают визуальную оценку результатов, что может быть полезно при отсутствии соответствующего оборудования.

Конъюгат, применяемый в таких тест-системах, может быть получен на основе поликлональных антивидовых антител (например, кроличьи антитела против иммуноглобулинов человека) или на основе поли- или моноклопальных антител, направленных против человеческих иммуноглобулинов определенного класса (М, G, А). В зависимости от того, какие антитела использованы, тест-система будет выявлять в исследуемом образце или любые специфические антитела независимо от их класса, или антитела лишь определенного класса (например, только IgG или только IgМ).

По такому принципу построена основная масса отечественных ИФА-тест-систем для диагностики различных инфекций (ВИЧ-ин-фекция, вирусные гепатиты, цитомегаловирусная, герпесная, ток-соплазменная и др. инфекции), в том числе и сифилиса.

В то же время, существуют тест-системы, в которых использована несколько другая схема (рис. 2) — ИФА с фиксированными антителами или «ловушка для антител» (Antibody capture ELISA).

Она основана на том, что на твердофазном носителе фиксируются аффинно очищенные антитела, специфически реагирующие с человеческими антителами определенного класса (IgМ, IgG или IgА). В результате инкубации с тестируемой сывороткой антитела этого класса связываются с носителем. Наличие среди них антител, специфических для какого-либо антигена (например, трепонемного), выявляется в ходе инкубации с этим антигеном, меченым ферментом. При инкубации с субстратом в том случае, когда в исследуемом образце присутствовали специфические антитела, развивается окрашивание раствора.

По такой схеме построены, например, коммерческие зарубежные тест-системы «Captia Syph G EIA», «Captia Syph M EIA» для выявления антител, соответственно, классов G и М к возбудителю сифилиса. На отечественном рынке диагностической продукции также существуют иммуноферментные тест-системы для выявления антитрепонемных иммуноглобулинов класса М, работающие по такой схеме, например, тест-система «РекомбиБест антипаллидум—IgМ -стрип».

Третья схема ИФА (рис. 3) используется в некоторых тест-системах для выявления суммарных антител, специфических для определенного антигена, независимо от их класса.

Её суть заключается в том, что специфические сывороточные антитела одновременно взаимодействуют с антигеном, зафиксированным на твердофазном носителе, и с тем же антигеном, меченым ферментом, при совместной инкубации сыворотки и конъюгата.

В зависимости от того, какие антигены используются, все иммуноферментные тест-системы для выявления антител подразделяются на:

  • лизатные — в которых в качестве антигена, иммобилизованного на твердой фазе или входящего в состав конъюгата, используется нативный антиген (лизированный или обработанный ультразвуком возбудитель инфекции, полученный в культуре);
  • рекомбинантные — в которых используются полученные генно-инженерным способом белки — аналоги определенных белковых антигенов возбудителя;
  • пептидные — использующие химически синтезированные фрагменты белков.

Общее направление развития ИФА-диагностикумов — это направление от лизатных тест-систем, которые принято называть тест-системами первого поколения, к рекомбинантным и пептидным.

Основными факторами, определяющими качество лизатной тест-системы, являются антигенная природа возбудителя и качество очистки лизата от посторонних примесей. В случае сифилиса первый фактор имеет особое значение. Антигенная природа бледной спирохеты такова, что наряду со специфическими, свойственными только ей, антигенами, существуют и такие, которые гомологичны антигенам других спирохет, антитела к которым могут присутствовать в организме человека. В трепонемном лизате представлены как одни антигены, так и другие, что может послужить причиной ложноположительных результатов при работе с лизатными тест-системами на сифилис. Так как антиген, используемый в таких тест-системах, аналогичен антигену, применяемому в РСК или РИФ, природа получаемых ложноположительных результатов та же, что и в указанных тестах.

Технология получения рекомбинантных белков позволяет получить в достаточно чистом виде аналог любого отдельного антигена. Для создания высококачественной рекомбинантной тест-системы необходимо из всего антигенного многообразия возбудителя выбрать антигены, которые отвечали бы следующим требованиям:

  • они должны быть высоко иммуногенными, т.е. в организме инфицированного человека должны вырабатываться антитела к этим антигенам в достаточно большом количестве;
  • антитела к этим антигенам должны присутствовать в определяемых количествах в крови больного в течение всего заболевания;
  • эти антигены должны быть высоко специфичными, т.е. характерными лишь для данного возбудителя и не дающими перекрестных реакций с антителами другой природы.
Другие публикации:  Прививки от гриппа 2015 воронеж

Кроме того, большое значение имеет качество очистки рекомбинантных белков.

В идеальном случае (при выполнении всех указанных требований) возможно получение рекомбинантной тест-системы практически со 100% -ной специфичностью при высокой чувствительности. На практике этого не всегда удается достичь, однако специфичность лучших рекомбинантных тест-систем приближается к 100%.

Гуднева Ирина
врач-лаборант

Зарегистрирован: 16.11.2008
Сообщения: 93

ИММУНОФЕРМЕНТНЫЕ ТЕСТ-СИСТЕМЫ
ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ СИФИЛИСА

В настоящее время Министерством здравоохранения России рекомендованы к применению в медицинской практике 10 иммуноферментных тест-систем для диагностики сифилиса отечественного производства:

  • «РекомбиБест антипаллидум», ЗАО «Вектор-Бест», п. Кольцове, Новосибирская обл.;
  • «РекомбиБест антипаллидум — суммарные антитела», ЗАО «Вектор-Бест», п. Кольцове, Новосибирская обл.;
  • «ИФА-АНТИ-LUIS», НПО «Диагностические системы», г. Нижний Новгород;
  • Тест-система иммуноферменгная для выявления ангител к возбудителю сифилиса (Treponema pallidum) на основе рекомбинангных белков, БТК «Биосервис», г. Москва;
  • «ЛюисСкрин», ЗАО «Ниармедик» и АЗОТ «Диаклон», г. Москва;
  • «ЭКОлаб-антипаллидум-скрин», ТОО «ЭКОлаб», г Электрогорск, Московская обл.;
  • «ИФА-анти-трепонема», ЗАО «Вектор-Майстар», п. Кольцове, Новосибирская обл.;
  • «АТ-Треп.-ИФТС», ГП «Аллерген», г. Ставрополь;
  • «Сиф-Ат-№1, 2», ТОО НИИ «Аквапаст», г. Санкт-Петербург;
  • «ИФАанти-СИФ», НПК «Препарат», г. Нижний Новгород.

Все эти тест-системы прошли государственные испытания в Центральном научно-исследовательском колено-венерологическом институте (ЦНИКВИ), имеют утвержденную Фармакопейным комитетом МинздраваРФ нормативно-техническую документацию и Приказом № 87 Министерства здравоохранения рекомендованы к практическому применению.

Большинство из перечисленных тест-систем являются рекомбинантными. В них в качестве специфического антигена, иммобилизованного на поверхности планшета, используются рекомбинантные белки — аналоги отдельных антигенов Treponema pallidum. Две тест-системы («АТ-Треп.-ИФТС» и «ЛюисСкрин») — лизатные. Основу тест-системы «Сиф—Ат—№1, 2» составляют химически синтезированные пептиды.

Часть перечисленных тест-систем предназначена для выявления трепонемоспецифических иммуноглобулинов класса G. Однако следует отметить, что благодаря высокой чувствительности, присущей иммуноферментному методу, позволяющей выявлять антитела в низкой концентрации, такие тест-системы не уступают в сроках диагностирования заболевания тем методам серодиагностики сифилиса, которые выявляют суммарные антитела (РСК, РПГА), но при их более высокой концентрации.

Безусловно, этот перечень далеко не полный. С каждым годом список разрешенных к применению тест-систем для серодиагностики сифилиса растет и видоизменяется. Сегодня на отечественном рынке присутствуют зарегистрированные иммуноферментные тест-системы для выявления иммуноглобулинов класса М, которые позволяют диагностировать приобретенную инфекцию в наиболее ранние сроки (IgМ появляются уже через 2 недели после заражения, тогда как IgG — обычно через 4 недели). Выработка IgМ в значительных количествах происходит не только при первичном заражении, но и при рецидивах и реинфекции, поэтому персистенцию IgМ рассматривают как показатель наличия в организме вирулентного возбудителя [13]. Снижение титра и исчезновение IgМ являются критерием эффективности терапии. Но особенно ценны такие тест-системы для диагностики врожденного сифилиса. Серологическое подтверждение врожденного сифилиса в ранние сроки после рождения ребенка возможно лишь при выявлении в его крови возбудителя инфекции или специфических антитрепонемных IgМ, которые, в отличие от IgG, не передаются от матери ребeнку, и их присутствие свидетельствует о наличии возбудителя инфекции в организме самого ребeнка [13].

В настоящее время утверждены и разрешены к применению отечественные тест-системы для выявления специфических IgМ: «ЛюисСкрин» (ЗАО «Ниармедик» и АЗОТ «Диаклон») и «РекомбиБест антипаллидум-IgМ-стрип» (ЗАО «Вектор-Бест»).

Министерством здравоохранения и медицинской промышленности России, с учётом мировой и отечественной практики, рекомендуется более широкое использование ИФА как в скрининговых исследованиях (в том числе при проверке донорской крови), так и в диагностических целях. В последнем случае он может быть использован как специфический подтверждающий тест наравне с РИФ, а рекомбинантные ИФА-тест-системы могут быть особенно ценны для распознавания ложноположителъных результатов, получаемых в тестах, использующих нативный трепонемный антиген. Рекомендуется замена общепринятого КСР на сифилис комплексом ИФА с МР преципитации с кардиолипиновым антигеном.

Иммуноферментные тест-системы для диагностики сифилиса выпускаются в виде многокомпонентных наборов, содержащих все реагенты, необходимые для проведения анализа, и инструкцию по их применению. В каждом диагностическом наборе содержатся положительный и отрицательный контрольные образцы сывороток, которые позволяют оценить качество набора и правильность проведения анализа. Оптическая плотность (ОП) в лунках с контрольными образцами должна соответствовать нормам, предусмотренным нормативно-технической документацией (НТД) на данную тест-систему и указанным в инструкции по применению диагностического набора. Только в этом случае набор считается пригодным к использованию, а полученные результаты состоятельными. К каждой партии наборов производителем должен прилагаться паспорт ОБТК на данную серию наборов, в котором отражается её соответствие требованиям НТД и основные контрольные показатели, полученные при выпуске тест-системы. Значительные отклонения получаемых контрольных значений ОП от паспортных свидетельствует либо об изменении качества наборов, либо о допущенных при постановке анализа ошибках.

Хотя все ИФА-тест-системы для диагностики сифилиса построены по единой схеме, каждая тест-система имеет свои особенности. Различия могут заключаться в степени рабочего разведения образца (1:10, 1:100, 1:200), в подходе к определению критической оптической плотности (ОП крит или Cut`off), по отношению к которой оценивается результат реакции. Предоставляемые аналитические возможности отдельных тест-систем также могут быть различны (например, т/с «РекомбиБест антипаллидум» позволяет исследовать не только сыворотку или плазму крови, но и ликвор). Кроме того, различаться могут составы и способы приготовления используемых растворов, методические детали проведения анализа (число промывок планшета на каждой стадии, продолжительность инкубации, условия хранения рабочих растворов и т.д.), поэтому при работе с любой тест-системой необходимо строгое соблюдение требований инструкции по её применению.

В то же время существуют общие требования, соблюдение которых способно снизить вероятность получения неправильных результатов анализа (см. раздел «Требования и рекомендации, соблюдение которых повышает достоверность результатов анализа»).

При оценке результатов ИФА необходимо помнить о существовании «серой зоны» — зоны сомнительных результатов, требующих дополнительных исследований. Если в инструкции по применению тест-системы рамки «серой зоны» особо не оговорены, «серой зоной» следует считать интервал ОПкрит±10%. Те значения ОП, которые лежат выше этой зоны, соответствуют положительному результату, те, которые ниже, — отрицательному. В зависимости от конкретных условий и конкретных задач исследования рамки «серой зоны» могут быть расширены (например, до 20%). Это имеет смысл при скрининговых исследованиях, особенно при скрининге донорской крови, а также при использовании оборудования с повышенной ошибкой измерения.

Образцы, для которых получен сомнительный результат (соответствующая им ОП находится в пределах «серой зоны») подлежат повторному анализу. Рекомендуется также повторить анализ образцов, давших положительный результат. При использовании ИФА в качестве скринингового теста воспроизводящийся сомнительный результат, так же как и положительный результат, является основанием для направления на обследование к дермато-венерологу и для исследования сыворотки крови другими методами. При этом необходимо иметь ввиду высокую чувствительность ИФА — часто подтвердить результат можно только в РИФабс, а при использовании других методов (МР, РСК) — лишь через некоторое время (в случае IgG — примерно через 1 неделю, в случае суммарных антител — через 1—2 недели). При использовании ИФА в качестве диагностического теста в случае получения воспроизводящегося сомнительного результата рекомендуется повторить анализ с новой порцией сыворотки крови, взятой через 3—7 дней. Относительное возрастание оптической плотности свидетельствует о ранней стадии инфекции; сохранение её на том же уровне возможно в двух случаях: сифилис в анамнезе, когда сомнительный результат связан с наличием в сыворотке крови остаточных антител, или ложноположительный результат.

Образец, давший положительный результат, может быть раститрован — при этом ИФА ставят с последовательными 2-кратными разведениями образца, начиная с рабочего разведения сыворотки в данной тест-системе. За титр антитрепонемных антител принимают наибольшее разведение сыворотки крови, дающее положительный результат. Титр является количественным показателем уровня специфических антител в данном образце и степени его позитивности. Он обозначается выражением, характеризующим степень разведения испытуемой сыворотки: 1:10, 1:20, 1:40 и т.д. (в тест-системе с рабочим разведением сыворотки 1:10) или 1:100, 1:200, 1:400 и т.д. (в тест-системе с рабочим разведением сыворотки 1:100). Прямое титрование образца значительно увеличивает стоимость анализа. В целях сокращения финансовых и трудозатрат отдельные производители предлагают использовать сокращенную схему определения титра антител. Так в тест-системе «Рекомби-Бест антипаллидум» возможно определение титра антител с использованием коэффициента позитивности (КП). Для этого положительный образец анализируется в двух разведениях — 1:10 и 1:100. Затем коэффициент позитивности вычисляется по формуле:

где ОПобр.(1:100) — оптическая плотность образца в разведении 1:100;
ОПкрит — критическая оптическая плотность.

Соответствие между полученным значением КП и титром антител определяется по таблице: